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ACE2 Stable Expression Cell Line (293T)
产品简介
| 品牌 | DELF |
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| 一、细胞简介 | ||||||||||||||||
| 细胞名称 | ACE2 Stable Expression Cell Line (293T) | |||||||||||||||
| 细胞货号 | Delf-28859 | |||||||||||||||
| 形态特性 | 上皮样，贴壁生长 | |||||||||||||||
| 培养条件 | DMEM培养基+90%（货号：Delf-16563）；优质胎牛血清+10%（货号：Delf-11405）； | |||||||||||||||
| 半药浓度 | Puro=1μg/mL 注意：为了维持基因表达量的稳定，建议传代时带药培养。 | |||||||||||||||
| 培养环境 | 气相：空气，95%；二氧化碳5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。 | |||||||||||||||
| 二、细胞复苏方法 | ||||||||||||||||
| 复苏步骤 | 1)准备工作：将培养液置37℃水浴锅预热30分钟，随后将冻存的细胞从液氮中取出，转移 到-80℃冰箱，放置数分钟让残余液氮挥发； 2)在超净台内用吸管吸取6-7 mL 培养液至15 mL 离心管中； 3)将细胞从-80℃冰箱取出暂时放置于干冰里，复苏时稍稍甩动，去除残留的干冰和液氮，再迅速 用镊子夹住盖子放入37℃水浴中快速晃动(注意：水不能没过盖子),使其在1分钟左右 融化； 4)在超净台内，用酒精棉球擦拭冻存管外壁消毒，稍稍晾干。用单道移液器将所有融化的细胞悬液 转至提前准备好的培养液中，盖上盖子，1100 rpm 室温离心4分钟收集细胞； 5)超净台内小心吸弃上清，用单道移液器吸取1 mL 新鲜培养液重悬细胞至单细胞悬液，再转 移至装有4 mL 培养液的T25 cm²培养瓶(或者6cm 的皿)中，写上细胞名称、复苏日期、 代次，放置37℃、5% CO2 饱和湿度培养箱内培养。 注意：请勿直接复苏到T75 cm²瓶或10cm 的皿。 | |||||||||||||||
| 三、细胞传代方法 | ||||||||||||||||
| 传代比例 | 1:3~1:6（具体情况视细胞生长速度及密度决定） | |||||||||||||||
| 传代方法 | 1)常规细胞长至80%-90%汇合度即可传代。在超净台内把培养瓶里的培养液倒至废液缸，用1× PBS(T25cm²培养瓶添加约2~3mL,T75 cm²培养瓶约4~5mL) 洗涤细胞1~2次，以去 除残余的培养液和血清(血清含有的抑制因子); 2)加入相应体积的溶液，具体参考附表1,轻轻晃动瓶子并使浸过细胞，将培养瓶放 入培养箱孵育1~2分钟(若细胞难以消化，可适当延长孵育时间),待在显微镜下观察到大部 分细胞变圆不贴壁，轻轻晃动和敲击培养瓶两侧有大量细胞脱离时，立即终止消化； 3)加入2倍体积的培养液终止消化，并轻吹打细胞数次，使所有细胞脱壁； (注意： 吹散细胞时注意要轻柔，尽量不产生气泡或尽可能产生少量气泡。); 4 ) 用 10 mL 移液管转移细胞悬液到一支50 mL 离心管中，同一批次的细胞可以合并收集在一起， 视情况用适量 PBS 将培养瓶里的残余细胞洗下来， 一起加到50mL 离心管中。盖上盖子，做好 标记； 5)1100rpm 室温离心4分钟，离心后，打开盖子弃上清，加2mL 培养基重悬细胞； 6)细胞按照一定的接种比例传代，按照1:3进行传代，若细胞在两天内长满可增加传代比 例，若细胞生长三四天还未长满，可适当缩小传代比例。 | |||||||||||||||
| 注意事项 | 不同品牌消化时间差别较大，可根据细胞形态判断消化进程 | |||||||||||||||
| 四、细胞冻存方法 | ||||||||||||||||
| 冻存液配方 | 冻存液：50%DMEM+40%FBS+10%DMSO，现用现配。 | |||||||||||||||
| 冻存规格 | 按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。 | |||||||||||||||
| 冻存方法 | 1)按细胞传代的方法，在超净台内把培养瓶里的细胞进行消化至单细胞悬液，加入培养基终止反 应。所有液体转移到一支50 mL 离心管中。 2)用移液管吹打混合均匀，取20 μL 进行细胞计数； 3)1100rpm 室温离心4分钟，离心后，打开盖子倒去上清，用1~2 mL4℃ 预冷的冻存液重悬细 胞，随后加入冻存液调整至密度为1x10⁶-1x10⁷ 个细胞/mL。 4)将细胞悬液按1 mL/ 管平均分装至冻存管中，旋紧盖子，冻存管应提前贴好细胞名称、细胞代 次、数量、冻存日期； 5)将冻存管放置于4℃预冷的程序降温盒中，并在冻存结束的15分钟之内将程序降温盒放置超低 温冰箱内； 6)过夜后，将冻存细胞转移至液氮罐内保存。 | |||||||||||||||
| 五、注意事项 | ||||||||||||||||
| 注意事项 | 1、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。 2、建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意：冻存管浸没在液氮中会泄漏，并会慢慢充满液氮。解冻时，液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子，从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。 3、本产品于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用。 | |||||||||||||||
| 细胞培养清除试剂 |
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我们主要的产品有：病理学检测服务，细胞与蛋白，分子生物学检测，动物实验造模，科研细胞及相关周边配套产品与服务。
细胞产品：包含细胞系、原代细胞、永生化细胞（支持定制），Luc示踪细胞、IPS细胞、耐药株、细胞代购服务。
病理服务：包含普通病理（包埋，切片，染色）、分子病理（组化、免疫荧光、TUNEL、原味杂交）、病理图像（切片扫描、单标多标、共聚焦、三维重建）、超微病理（透射电镜、扫描电镜、免疫电镜服务）。
培养基产品：包含基础培养基如DMEM、DMEM/F12、1640、MEM、EMEM、F12、F12K、L15、DMEM低碳、1640低碳，无酚红定制产品等基础培养基供应。
细胞系专用培养基：涵盖我库所有细胞系对应的专用培养基（含血清，因子，双抗等），价格实惠。
原代细胞专用培养基包括：
DELF原代上皮细胞专用培养基（EpiCM）
DELF原代成纤维细胞专用培养基（FM）
DELF原代内皮细胞专用培养基（ECM）
IPS人诱导多能干细胞专用培养基
DELF原代神经元细胞专用培养基
DELF原代少突胶质细胞专用培养基
DELF原代星形胶质细胞专用培养基
DELF原代肝实质细胞专用培养基
DELF原代星状细胞专用培养基
DELF原代角质形成细胞专用培养基
DELF原代巨噬细胞专用培养基
DELF原代间充质干细胞专用培养基
DELF原代内皮祖细胞专用培养基
DELF原代神经干细胞专用培养基
DELF原代周细胞专用培养基
DELF原代雪旺细胞专用培养基
DELF原代黑色素细胞专用培养基
DELF原代骨骼肌细胞专用培养基
DELF原代成骨细胞专用培养基
DELF原代软骨细胞专用培养基
DELF原代肾系膜细胞专用培养基
DELF原代心肌细胞专用培养基
DELF原代前脂肪细胞专用培养基
DELF原代间充质干细胞无血清专用培养基
DELF原代平滑肌细胞专用培养基
DELF原代平滑肌细胞低血清专用培养基
DELF原代肿瘤细胞专用培养基
DELF原代间质细胞专用培养基
DELF原代T淋巴细胞专用培养基
DELF原代卵巢颗粒细胞专用培养基
DELF原代肥大细胞专用培养基
DELF原代破骨细胞专用培养基
DELF原代NK细胞专用培养基
DELF原代内膜细胞专用培养基
DELF原代B淋巴细胞专用培养基
DELF原代精原细胞专用培养基
DELF原代树突状（DC）细胞专用培养基
DELF原代肝卵圆细胞专用培养基
DELF原代肾足细胞专用培养基
DELF原代基底细胞专用培养基
DELF原代基质细胞专用培养基
DELF原代CIK细胞专用培养基
DELF原代淋巴细胞专用培养基
DELF原代肌腱细胞专用培养基
DELF原代卵泡膜细胞专用培养基
DELF原代支持细胞专用培养基
DELF原代髓核细胞专用培养基
DELF原代脂肪细胞专用培养基
DELF原代绒毛膜滋养层细胞专用培养基
请注意：
所有500ml专用培养基采用分装形式发货，其中细胞因子，双抗，血清采用干冰发货，基础培养基采用冰袋发货。收到货后根据业务经理提示的配置方式进行配置，各成分按照存储温度分开存储。
1）细胞冻存复苏操作
取装有1 mL 细胞悬液的冻存管，置于 37 ℃水浴中快速振荡至完全解冻；将细胞悬液移入装有 4~6 mL 完全培养基的离心管，充分混匀。 1000 RPM 离心 3~5 min，弃除上清，加入新鲜完全培养基重悬细胞。把细胞悬液接种至培养瓶（培养皿），补加 6~8 mL 完全培养基，于 37 ℃恒温培养箱静置培养过夜。次日在显微镜下观察细胞状态与汇合密度。
2）细胞传代培养
当细胞汇合度达到 80%~90% 时即可进行传代操作。 本细胞贴壁性能弱，属于半贴壁 + 半悬浮混合生长型细胞，传代操作步骤如下：
1. 细胞收集 先把培养瓶内悬浮细胞全部转移至离心管；采用无钙镁 PBS 洗涤贴壁细胞 1~2 次。该细胞贴壁不牢固，洗涤过程中贴壁细胞会随 PBS 脱落，因此洗涤液同样收集至离心管内。
2. 胰酶消化 向培养瓶内加入 0.25%(w/v) 胰蛋白酶 - 0.53 mM EDTA 消化液（T25 培养瓶加 1~2 mL，T75 培养瓶加 2~3 mL），放入 37 ℃培养箱消化 1~2 min；若细胞较难消化，可适度延长消化时长。显微镜下观察，待绝大多数细胞回缩变圆、开始脱壁后迅速取出培养瓶，轻敲瓶壁，随即加入 3~4 mL 含 10% 胎牛血清的培养基终止胰酶消化。
3. 离心分瓶接种 将悬浮细胞、PBS 洗涤细胞与胰酶消化收获的所有细胞合并，1000 rpm 离心 5 min，弃上清。加入 1~2 mL 新鲜培养基充分重悬，按照 1:2 的比例分装至新 T25 培养瓶，每瓶补加 6~8 mL 新鲜配制的完全培养基，维持细胞活性。后续传代可依据细胞生长速率，调整分装比例为 1:2 ~ 1:5。
3）细胞冻存保种
建议在细胞到货后的前 3 代完成种子细胞冻存，留存保种库，保障后续实验供给。 以 T25 培养瓶为例，操作流程如下：
1.参照细胞传代流程完成细胞消化与收集，使用血球计数板测定活细胞浓度。推荐冻存终密度：(1×106 至1×107) 个活细胞 /mL。
2.1000 rpm 离心 3~5 min，充分弃除上清液；用预先配制好的冻存液重悬细胞，调整浓度至目标密度，分装至细胞冻存管。在冻存管外壁清晰标注细胞名称、细胞代数、冻存日期等关键信息。
3.将冻存管放入程序降温盒，置于 - 80 ℃冰箱梯度降温过夜；次日转移至液氮罐中长期保存，同步登记冻存位置编号，方便后续调取。
悬浮细胞传代方法
1.当细胞密度达到8-10×105cell/ml 时，进行传代处理。
2.在生物安全柜无菌环境下打开培养瓶，将瓶内全部细胞悬液移入离心管。
3.1000 rpm 离心 5 min，离心结束后弃除上清培养液。
4.准备 2 支全新 T-25 培养瓶。向细胞沉淀中加入完全培养基充分重悬，把细胞浓度调整至 2-4×105cell/ml，均分接种至两个培养瓶内，每瓶补加培养基至 6～8 mL。
5.水平平放培养瓶，轻轻摇匀细胞悬液，放入 37 ℃、5% CO?恒温培养箱静置培养。
仅用于科研，不用于临床
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